Etwas verspätet, No pour Agar.
Definition "no pour Agar" - pour = gießen, womit der Prozess gemeint ist, bei dem man sterilisiertes Agar in sterile Petris gießt, dann abkühlen lässt und beimpft.
Weil ich aber in einer SAB (still air box) arbeite und dort nicht allzu viel Platz ist + die Petris dort gestapelt werden müssen, wenn es mehr als ein Paar sind und durch die Wartezeit mit offenen Armlöchern und unverschlossenen Platten ich einfach ein ungutes Gefühl habe, werden die Petris mit Nährboden sterilisiert und zwar folgendermaßen:
Ich hatte noch einiges an sterilisiertem Agar hier rumstehen, das wurde jetzt verwendet, ignoriert die Katzenhaare auf der Flasche, stand wie gesagt ein bisschen rum.
Festes Agar muss im Wasserbad für zwei Ewigkeiten wieder weichgekocht werden oder nochmal in den Dampfdruckkochtopf (hätte mir auch mal vorhin in den Sinn kommen können..), deshalb ist es empfehlenswert jedesmal die Menge frisch zu kochen, die man braucht, weil es einfach schneller geht.
Dafür kann ich die Pyrex Messbecher aus Borosilikat empfehlen, stelle ich einfach direkt auf die Platte und ist nachher in Sekunden wieder sauber.
Die Petris breite ich auf der Arbeitsplatte aus und fülle sie 2-3mm (vorsicht dünne Schichten trocknen schneller aus und können nicht über Monate gelagert werden).
Hier muss nichts steril passieren, ihr könnt vollkommen ohne euch Gedanken machen zu müssen arbeiten.
Anzumerken ist außerdem dass die Petris nicht bis zur Hälfte befüllt werden, um Sauerei zu vermeiden! Platten die überkochen verwende ich nicht mehr, Nährboden außen an der Platte lädt Kontaminationen grade zu ein das Projekt zu versauen.
In die zwei dunklen Platten hab ich direkt nach dem befüllen etwas Aktivkohle eingerührt, die Platten werden für einen Wildfund genutzt.
Nach dem befüllen bleiben die Petris offen für ca. 5 min stehen, bis sie fest sind, nicht gestapelt, sonst dauert es länger.
Dann wird eingepackt.
So viele man möchte werden gestapelt und auf die Alufolie gestellt, damit man sie nach oben hin einpacken kann.
Die kleinen Platten hab ich als Experiment zusätzlich in Gläser gepackt, um zu sehen ob dadurch weniger Feuchtigkeit um und in den Platten ist.
Mit Absicht wurde die Folie oben etwas länger gelassen, damit das Pack später einfach aus dem Glas ziehbar sind.
Wie gesagt nur ein Experiment, normal wird einfach in Alu gewickelt und sterilisiert.
Ich mache 30 min ab erreichen des Drucks, andere machen 20 oder 25 min, das kann jeder für sich entscheiden.
Der Druck wird nicht manuell entlassen, sobald die Sterilisation fertig ist! Dadurch kann das Agar überkochen und alles war umsonst.
Von alleine abkühlen lassen.
Hier ist es wichtig die Platten wirklich im Topf abkühlen zu lassen, das dauert 4-5 Stunden, eher 5 um auf Nummer sicher zu gehen.
Wegen der Wartezeit ist es am besten das Agar abends zu kochen und zu sterilisieren und dann am nächsten Tag zu beimpfen oder man macht es am Wochenende morgens/mittags und beimpft dann abends, nachdem man für 5 Stunden was sinnvolles gemacht hat.
Also jetzt ist alles abgekühlt und in die SAB geladen.
Wie hier zu sehen ist, ist etwas Wasser in der Petri (Anmerkung die dicken Handschuhe wurden nur für das Bild angezogen, normal verwende ich Einweghandschuhe).
folgendermaßen wird das Problem gelöst.
Die Bodenplatte schiebe ich nach oben, sodass sich die Lücke zwischen beiden Platten oben schließt
Und unten wo das Wasser ist öffnet
Platte auf den Kopf drehen, und zweimal kurz auf ein Blatt frische Küchenrolle klopfen, damit sich das meiste Wasser im Deckel sammelt
Danach wird die Platte wieder normal gedreht und das Wasser durch kurzes klopfen durch die Lücke auf das saubere Papier geklopft, danach runderum mit der Küchenrolle trocken gewischt.
Anschließend wird ganz normal mit Sporen, Klonsample, LC oder Agar beimpft.
Hier ist zu sehen, dass später in den Platten immer noch etwas Kondensation ist, das ist aber nicht schlimm und wird mit der Zeit vom Myzel verbraucht.
Die grünen Brocken sind kein Schimmel, sondern Algen, die sich aus dem Nährboden abgesetzt haben.
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Die Prozedur mag durch den vielen Text und die Bilder für Agar Anfänger umständlich wirken, aber das ist es nicht, ein guter Teil des Textes sind kurze Infos um Fehler zu vermeiden.
Durch schnelles Arbeiten und Routine ist das schnell gemacht!
Für große Mengen Platten 12+ würde ich die Methode nicht empfehlen, weil das ausgeschüttete Wasser sonst zu viel wird und alles feucht ist.
Größere Mengen sind deutlich angenehmer normal vorsterilisiert zu gießen, dafür würde ich aber eine flowhood empfehlen.
ich mag die freaks
