Vermeidung von Anfängerfehlern/ Ausstehende Fragen

[HansKeller]

Hallo zusammen!

Ich möchte als Neuling natürlich keinen neuen Thread öffnen und dieser hier passt auch sehr gut zu meinem Problem. Wir Ihr folgerichtig vermutet, bin ich bei meinem (angehenden) ersten Grow auf Fehlersuche und hoffe hier Hilfe zu finden. Genau wie LovesLife versuche ich mich an der Casing-Methode und komme einfach nicht über Schritt 1 (erfolgreiches Inokulieren mit Sporenspritze) hinaus. Folgendes ist geschehen:

Ich habe eine Spritze mit B+ Sporen benutzt und versuche nach folgender Anleitung vorzugehen:

https://de.scribd.com/doc/47406962/Psil ... ultivation

900ml Gläser wurden mit 175g Roggen+230ml Wasser im DDKT für >90min sterilisiert. Gläser wurden über Nacht abkühlen gelassen und am Folgetag dann beimpft. Vorgegangen wurde wie folgt:

"Impfbox" besteht aus einer schlichten Ikea-Kiste aus Kunststoff in die ich 2 Löcher geschnitten habe. Die Gläser wurden direkt aus dem DDKT in die gereinigte Box gestellt, welche danach von innen mit Sterillium(Virugard) ausgenebelt wurde. Dann wurde die Box erstmal für 10min stehen gelassen und die Löcher für die Hände wurden auch vorher zugeklebt. Danach habe ich, mit OP-Mundschutz und explizit desinfizierten Aids-Handschuhen erstmal alle Gläser (innerhalb der Box) geschüttelt, damit sich die trockenen und feuchten Körner vermischen. Die frische Spritze wurde geschüttelt und die Nadel mit einem Löt-Feuerzeug ausgeglüht. Wegen der evtl. Explosionsgefahr habe ich die Nadel außerhalb der Box erhitzt. Dann habe ich das erste Glas genommen, den Deckel locker geschraubt und etwas angehoben. Ich habe die Alufolie nicht abgemacht, sondern den Deckel ca. 2cm angehoben und dann seitlich durch die Alufolie etwa 2ml hineingespritzt. Danach den Deckel wieder aufgeschraubt, das Glas nochmal geschüttelt und die Alufolie wieder angepasst. Dabei habe ich darauf geachtet, dass mein Einstichloch wieder durch eine Falte in der Alufolie verschlossen ist. Alle weiteren Gläser habe ich genauso präpariert und dann alles zusammen in einem Müllbeutel, in einen Karton gestellt. Die Deckel wurden zwecks Luftaustausch nicht ganz zugedreht und quasi halb-locker aufgelegt. Temperatur wurde dann auf 27°C gehalten (Thermometer mit Kabelfühler).

Alle 2-3 Tage habe ich die Gläser kontrolliert (mit Mundschutz und Handschuhen) und auf Wachstum untersucht. Es kam und kam nichts. Habe den Lieferanten nach 6 Tagen angeschrieben und ihm Fotos von dem ganzen Vorgang und Gegebenheiten geschickt. Ich war davon ausgegangen alles richtig gemacht zu haben, und das die Sporen schon bei Anlieferung tot waren. Der Lieferant hat die Bilder seinem "Supplier" übermittelt und meinte dann, dass es mehrere Reklamationen bei diesem Strain gab und ich wohl alles richtig gemacht hätte. Habe eine neue Spritze als Ersatz bekommen, jedoch zwischendurch bei einem anderen Händler eine weitere bestellt.

Nach 8 Tagen habe ich die Gläser dann mal komplett geöffnet und untersucht. Es war kein ungewöhnlicher Geruch oder Verfärbung wahrnehmbar, aber auch weiterhin nicht die geringste Spur von Myzel. Habe dann den Inhalt entsorgt und die Gläser gewaschen. Neulich wieder neu mit Roggen befüllt, sterilisiert und das Ganze dann wiederholt. Diesmal jedoch mit der Spritze von dem anderen Händler, welche zwischenzeitlich eintraf.

Nun sind wieder 5 Tage vergangen und es ist wieder nicht die kleinste Spur von Myzel-Wachstum sichtbar. Die Gläser sind im Dunklen, können atmen und haben immer 26-27°C.

Das jetzt vom 2. Händler eine tote Spritze kam ist kaum vorstellbar. Es gilt für mich eigl. als sicher, dass ich die Sporen an irgendeinem Punkt kille, bzw. das Wachstum verunmögliche. Ich glaube weniger, dass es an Kontis liegt, da auch beim 1. Versuch, nach 8 o. 9 Tagen nicht die geringesten Spuren von Kontamination zu sehen/riechen waren. Schreibt bitte was Ihr an Bildmaterial und sonstigen Informationen zum Vorgang braucht.

Ich freue mich auf hilfreiche Hinweise und bedanke mich schonmal herzlich im Voraus.

Fungus Heil!
Hans

[אל תשאלו]

So wie du es schreibst scheint alles gut gelaufen zu sein. Ich will es nicht ausschließen, dass deine zweite Spritze auch nichts taugte. Meiner Meinung nach ist die sicherste Methode mit Sporenspritzen von bekannten zu arbeiten oder noch besser mit Sporenprints, so dass man von Anfang an den Prozess im Auge hat.

[HansKeller]

Hmm....die erste 20ml-Syringe kam von [mäjik-maschrums-schop.kom]*, von denen habe ich dann auch Ersatz bekommen (diesmal Ecuador, da man mir von einer weiteren B+ abgeraten hat). Den 2. Versuch habe ich dann mit einer 10ml-Spritze von [schajanaschop.kom]* (auch B+) vorgenommen. Habe aber auch prophylaktischerweise 2 Prints von [schajanaschop.kom]* mit bestellt.

Würde mir auch gerne eine eigene Syringe anfertigen, doch leider habe ich etwas Angst, dies nicht steril hinzubekommen. Kann man es - mit der von mir oben zum Inokulieren beschriebenen Methode/Umgebung - auch sauber hinbekommen? Habe leider (noch) keinen Hepa-Filter für diesen Vorgang und nachdem was ich mir so an Infos eingeholt haben, scheint die Kontaminationsgefahr hier doch um einiges höher zu sein als beim Inokulieren von Gläsern.

PS: Ich weiß noch, dass ich mir die erste Spritze vor Gebrauch unter Licht ganz genau angeschaut hatte. Bis auf 2-3 größere schwarze Teilchen, waren mit dem Auge in der Flüssigkeit keinerlei Fremdkörper zu sehen. In zahlreichen Videos über die Anfertigung von Sporenspritzen, ist der Inhalt der Spritze oft eine dunkel-trübe Suppe. Ich hatte mich an diesem Punkt bereits gewundert, da ich auf jeden Fall erwartet hatte, die Sporen in der Spritze zumindest ansatzweise schwimmen sehen zu können.

*Ich hoffe ich versteht was/wen ich damit meine

[SeñorPedro]

Solche Sporenspritzen sind ein guter Einstieg in die Pilzzucht. So habe ich damals auch angefangen. Sobald man einmal lebendes Myzel hat gibt es genug möglichkeiten dieses zu vermehren ohne große Kontirisikos einzugehen (wie z.B. das herstellen einer Sporenspritze).
Dennoch ist auch das Herstellen einer solchen Spritze nicht alzu schwer und ohne Glovebox noch Hepafilter sehr gut realisierbar!


Was mir jetzt akut einfählt ist:
1. Hast du die Kanüle der Spritze kurz abkühlen lassen? Ansonsten wurden die Sporen beim rausdrücken gekocht.
2. Nach 8 Tagen kein Wachstum kann schon mal vorkommen. Besonders bei kommerziellen Spritzen, die evtl. wenig und dazu noch alte Sporen enthalten.

Mein Rat wäre, steriliesier nochmal 4 Gläser. Aber lass diesmal vorher den Roggen über Nacht einweichen und köchel ihn noch ca. 20 Minuten.
Beim inokulieren mehr als nur 2ml der Spritze verwenden, evtl. 4-5ml. Und glüh die Kanüle nur beim ersten mal aus.

Zu deinem letzten Punkt, selbst wenn der Inhalt komplett klar ist muss das nicht heißen, dass nicht genug Sporen darin enthalten sind. Und Mehr ist nicht unbedingt immer besser.

Halte uns auf den laufenden

LG Pedro

[HansKeller]

Ahhh, ich glaube es nicht !!!

Soeben nachgeschaut (Tag 6) und an allen Gläsern ist an vielen Stellen Myzelwachstum zu sehen!

Da war ich wohl etwas zu ungeduldig mit den Kleinen. Leider habe ich billige Alufolie benutzt, sodass, vermehrt an den Rändern des Deckels, die Alufolie rissig geworden ist durch das Sterilisieren. Habe so weit es geht, die Risse/Löcher wieder mit Falten verschlossen bzw. verdeckt. Hoffe da kriechen keine Kontis rein...

Meint Ihr ich sollte da nochmal mit Sterillium drüber gehe?

[SeñorPedro]

Ich habe zwar nicht richtig verstanden wie du deine Gläser prepariert hast, aber im Zweifel eher weniger machen als zu viel. Du holst dir nur den grünen Teufel ins Glas wenn du da jetzt zu viel rumdoktorst

Und für die Zukunft würde ich dir empfehlen Löcher in die Deckel deiner Gläser zu machen und da Aquariumfilterwatte durch zu stopfen. Durch die wird dann innokuliert.